https://hemerotecadigital.uanl.mx/files/original/268/14472/1965._CUADERNOS_DEL_INST._DE_INVEST._CIENTIFICAS._1965._No._7._Mayo._0002016413.ocr.pdf 0c7dcb9e453e1c0d9254f07b249842b3 PDF Text Text ����la hialuronidasa de la orina, cuando se estudió en personas normales, mostró una correlación negativa con el volumen excretado. En otras palabras, la actividad de la orina (muestra de 0.5 ce. fueron usadas para medir el cambio en la vi~ cosidad del ácido hialurónico) disminuyó cuando aumentaba la diuresis y aproximó a cero en grandes volúmenes. En adición a esta información, da tos obtenidos de pacientes que mostraban algún tipo de padecimiento renal mostraron una disminu ción en la actividad enzimática. La sugestión se hizo entonces de que la enzima era secretada por células de los túbulos renales Ginetzinsky también reportó que los extractos de tejido renal contenían una gran cantidad de hialuronidasa. De hecho. en perros la actividad de la enzima en extractos de riñón contenían una actividad mucho mayor que la encontrada en extractos testiculares; pero no se dieron muchos datos. Con esta in formación Ginetzinsky sugirió que esos cambios de las concentraciones enzimáticas de orina, podían tener un significado fisiológico, y que el sistema de ácido hialurónico-hialuronidasa podía tener un efecto en la producción normal de orina. Para dar mayor fuerza a esta teoría, Ginetzinsky (2) en 1958 efectuó una serie de experimentos en perros. Estos experimentos fueron diseñados para mostrar el efecto de la dilución urinaria y de la concentración de sales en la actividad de la hialuronidasa. La actividad de la hialuronidasa fué determinada en la orina después de diálisis y ajuste al mismo volumen 2 (correspondiendo a la diuresis de,)1,2 ml/min/M ) Los animales fueron sujetos a diuresis acuosa, a diuresis osmótica por urea y a extractos de hipi fisis. Ginetzinsky reportó que la actividad de la hialuronidasa fué mayor en aquellas condiciones en las cuales la concentración de vasopresina fué más alta en el sistema sanguíneo. No se encontró actividad en los animales que fueron s~ metidos a diuresis acuosa . Concluyó que había una relación directa entre el proceso de reabso! ción del agua y la excreción de hialuronidasa por las células renales. Ginetzinsky (3) lanzó la hipótesis de que la hormona antidiurética ca~ saba secreción de hialuronidasa, la cual actuaba sobre los mucopolisacáridos del cemento intercelular causando su despolimerización y así incrementaba la permeabilidad al agua en los tubos c~ lectores. La evidencia presentada para despolim~ rización de estos mucopolisacáridos, viene de los siguientes experimentos . Se usaron ratas blancas. Se sacrificaró un grupo a nivel de la diuresis máxima; otro grupo fué deshidratado por 48 horas . Inmediatamente después de sacrificadas, a las ratas de ambos grupos se les extirparon los riñones, y éstos se sujetaron a estudio histológico, La técnica de teñido pertenece a Hess y Hollander (4) . Este método se supone que tiñe los mucopolisacáridos con aspecto metacromático, de acuerdo con el gr~ pode Ginetzinsky los mucopolisacáridos se encuentran a todo lo largo del nefrón especialmente 3 2 ����anestesiadas con pentobarbital (15 Mgrs.) y para la fijación tisular los riñones fueron perfundidos a través de la aorta abdominal con una solución al 10% de ácido tricloroacético. El tejido se pasó a las técnicas ordinarias histológicas de inmersión en parafina haciéndose corte de 10 micras y se tiñó para los grupossulfhidrilos de las proteinas por una modificación del método de Barrnet Seligman ( 16, 17). En este método el reactivo para sulfhidrilo 2,2'-dihidroxi 6.6' dinaftil-disulfuro (DDD). que se une a los grupos sulfhidrilo de los tejidos, fué usado. Un grupo naftol presente en el reactivo se une al colorante diazo (fast blue RR) para formar un complejo insoluble y altamente coloreado, Este complejo se adhiere a las leyes de Beer y Lambert. Los grupos disulfuros unidos a las proteinas fueron reducidos a grupos sulfhidrilos con ácido tioglicólico (TGA) (IS). Entonces los tejidos fueron teñidos con el procedimiento para los sulfhidrilos. Las cantidades en el citoplasma de las células renales tubulares de grupos sulfhidrilos unidos a las proteinas (PBSH) y disulfuro (PBSS) fueron medidas cuantitativamente utilizando una técnica de microespectofotometria usada por Pollister y Moses (19). Las concentraciones relativas en el citoplasma de PBSH y PBSS fueron calculadas midiendo la extinción de cilindros de citoplasma de uno a dos micras 10 de diámetro. Los valores de extinción obtenidos fueron medidos a 530 milimicras, que es la máxima obsorción del complejo coloreado. Quince células fueron leidas por cada parte del nefrón haci~ndose tres lecturas en el citoplasma de cada una de estas células. Los resultados fueron expresados como medidas de extinción. ADENDUM. Las ratas de control en los experimentos en los cuales se administró hormonas, recibieron inyecciones salinas del mismo volumen. Las inyecciones se dieron subcutáneas y antes de la anestesia. RESULTADOS EXPERIMENTALES. Esta serie de experimentos han sido producidos bajo la hipótesis de que la vasopresina podia afectar la función tubular modificando la concentración de grupos sulfhidrilo y disulfuro unidos a las células renales. Utilizando las técnicas anteriormente descritas, se midió histoquimicamente la concentra ción de los grupos sulfhidrilo y disulfuro uni~ dos a las proteinas de las células del riñón de ratas normales. La Fig. (1) dá un promedio de los valores encontrados en diferentes áreas 11 �del nefrón; se dan también valores osmóticos de los líquidos encontrados dentro y fuera de los túbulos. Debe ser señalado el alto contenido de azufre en aquellas áreas de la nefrona en las que se supone que poseen un mecanismo activo para el transporte iónico. El primer experimento se sumariza en la tabla l . Un grupo de 30 ratas se trató como sigue: (a) . - 5 ratas fueron usadas como control. (b). - 5 ratas fueron deshidratadas por 48 horas en la hipótesis de que esto debería aumentar la secreción endógena de hormona antidiurética. En este grupo si bien se controló la ingestión de agua se les permitió libertad en la ingesta del alimento. Como se muestra en la tabla (1) una disminución significante en los sulfhidrilos unidos a proteínas fué observado en los túbulos contorneados proximales, en los túbulos próximo terminales, en la asa ascendente en el área luminal en los túbulos contorneados distales y en los túbulos colectores. Se administró subcutáneamente a 5 ratas 100 mU de hormona antidiurética. Los animales se sacrificaron dentro de un periodo de 80 minutos después de la inyección. Se observó una disminución en el contenido de grupos sulfhidrilos unidos a las proteínas en las siguientes áreas del nefrón; Los túbulos próximo terminales, los túbulos contorneados distales y la porción a~ cendente de la asa de Henle en su área luminal. Sin embargo, el grado de disminución era diferente en cada rata dependiendo de el tiempo en que se sacrificó el animal después de la inyección de vasopresina. (d).- Se utilizó también en la misma manera oxitocina que tiene una estructura química muy relacionada con la hormona antidiurética. La oxi•tocina no produjo ningún cambio significativo en el contenido de grupos sulfhidrilo o disulfuro unidos a las proteínas en alguna parte del nefrón. (e).- Se hiperhidrató a 5 ratas con agua corriente (5% del peso corporal por sonda a estómago), se sacrifi có a las ratas durante la diuresis acuosa. Se observó en este grupo 13 ��horas. Heller (21) demostró la presencia de una substancia antidiurética en la orina de ratas deshidratadas. Dado que los experimentos previos han mostrado que la hormona antidiurética, así como la deshidratación producían cambios en el contenido de grupos sulfhidrilos unidos a las proteínas en todo el nefrón; en los siguientes experimentos los túbulos próximo terminales se seleccionaron como representantes del nefrón completo. Se trataron cuatro grupos de ratas como sigue: ( a J.- Un grupo de cinco ratas fueron usadas como control. ( b). - Se deshidrató un grupo de cinco ra- tas por 24 horas. ( c). - Se deshidrató un grupo de cinco ratas por 48 horas. ( d). - Se deshidrató un grupo de cinco ratas por 72 horas. En los grupos de ratas deshidratadas y también en el grupo de control, se les permitió obt&ner alimento a libertad. La tabla (2) suma riza los resultados de este experimento. Semostró claramente que la disminución en los grupos sulfhidrilo unidos a proteínas era máxima después de 24 horas, dicha disminución es de signi ficación estadística. La deshidratación por 48 16 y 72 horas no cambiaron estadísticamente los sulfhidrilos unidos a proteínas de los valores de las deshidratadas en 24 horas. Se sugiere que la liberación de vasopresina endógena es probablemente máxima dentro de 24 horas de deshidratación. La concentración de uniones disulfuro no mostró cambios significantes. Con la hipótesis de que el agua P!!: ~ pue de suprimir el nivel de hormona antidiurética endógena, se hizo un experimento en el cual se les permitió a las ratas deshidratadas tomar agua ad libitum y se le sacrificó a diferentes intervalos de tiempo. Los resultados se sumarizan en la Fig. (3). Se puede observar que como en el segundo experimento (sumarizando en la Fig. 2), una tendencia a la recuperación en el contenido de grupos sulfhidrilos unidos a las proteínas se observan casi a los niveles de control. Durante la recuperación de la deshidratación (se puede comparar a la recuperación de una dosis exógena de vasopresina). Las uniones disulfuro unidas a las proteínas mostraron una disminución casi hasta cero. Es posible que debido a lo corto de este experimento nuestros resultados no mostraron una completa recuperación en el contenido de uniones disulfuros de las proteínas de las células renales. También se encontró una correlación positiva entre la cantidad de agua ingerida y la recuperación de los sulfhidrilos unidos a 17 �proteínas en los túbulos próximo terminales . Esta correlación se muestra en la Fig. (4) . Nuestro experimento final se designó para encontrar la curva de dosis respuesta para la vasopresina acuosa. En este experimento las ratas se alimentaron y se les dió agua ad libitum usaron 10 y 100 mU, no tuvo diferencia significante de la encontrada con 1 mU " Esto puede significar que el nivel máximo de hormona antidiuré tica endógena en estas ratas es menos de 1 mU. Cantidades mucho más pequeñas que ésta deben ser usadas para determinar la curva de dosis repues- y se trataron como sigue: ta a la vasopresina acuosa . (a).- Se usaron cuatro ratas como control, recibiendo una inyección salina 15 minutos antes de ser sacrificadas. (b).- Se le dió a un grupo de cuatro ratas 1 ~U de vasopresina. (c).- Se le dió a un grupo de 4 ratas 10 mU de vasopresina. (d) . - Se le dió a un grupo de 4 ratas 100 mU de vasopresina. Todas las ratas que recibieron vasopresina acuosa subcutánea fueron sacrificadas entre 15 y 22 minutos después de la inyección, pues en experi~ontos previos ha sido observado que este es el tiempo para una depresión máxima en la concentración de sulfhidrilos unidos a las proteínas . Se extrajeron los riñones y se prepararon como en experimentos previos . La tabla (3) sumariza el resultado de este experimento. Se puede observar que 1 mU de vasopresina causa una disminución máxima en el contenido de sulfhidrilos unidos a las proteínas de las células de los túbulos próximo-terminales. La disminución encontrada cuando se 18 DI S CU SI O N. Estos experimentos confirman y complementan el trabajo de otros investigadores , mostrando claramente que la hormona antidiurética endógena o exógena produce cambios en el contenido de sul fhidrilo s unidos a las proteínas los cuales fueron observados en todos los tipos de células tubulares . No parece que la reducción de los grupos sulfhidrilos unidos a las proteínas sea debida a una simple reacción entre la hormona y los grupos sulfhidrilos de las célula renal. Esto se sugiere dado que los siguientes cálculos muestran su improbabilidad . La vasopresina tiene peso molecular de aproximadamente 1,000 y 23 en una molécula gramo hay 6 . 02 x 10 moléculas 12 por lo tanto , 0 . 001 de un nanogramo ( 1 x 10- g} que corresponde en término de peso a cerca de una miliunidad ( dosis mínima usada para obtener una depresión máxima en los grupos - SH unidos a 11 molas proteínas ) , deberá contener 6 . 02 x 10 léculas . Dado que el riñón de la rata puede con19 ��hormona antidiurética ha sido considerada pero no es mantenida dado que tal bomba de agua no tiene una base experimental o termodinámica. SUMARIO 1 . - En ratas sujetas a deshidratación o inyectadas con vasopresina, se encontró una disminución significante en los gr~ pos sulfhidrilos unidos a proteínas, se gún fué medido histoquímicamente, dicha disminución se encontró en todas las áreas estudiadas del nefrón. 2. - Durante la recuperación de la vasopresina endógena o exógena los disulfuros unidos a las proteínas disminuyeron a niveles muy bajos. 3.- La curva de respuesta a la vasopresina no tuvo éxito, quizás debido a que se usaron dosis muy altas. 4.- Una explicación para los hallazgos de nuestros experimentos es presentada durante la discusión. 22 ..., ='"''" i B.S. ' Deshidratación i s.s. ' Pitr~ss in i ' ' ltidrataci6n ' - ·"'. i ,- Pl.trusin ' 1'.P.t. ..·""',,- .-O!~ i 8,5, Sidl'at;ae:1611 ... ..., ... ·º" .,.. ·º" .olo .318 .-.0!7 .grl,. .,oo 1.s. -515 • o~? A.B. ..., , _.. ·"' ·º" . • ·""' .olo .Hi3 • !.0!7 •ofo .0,7 . ofs ,035 ,414 ,OTJ .:º!6 .oro .196 .001 . • ·"'. .:~7. . . . ·"'• .:º!º -~- =~ ...·""' . . .001 .:º!2 ,112 .:~7 .101 . ,336 .068 o ·"'' 00 ¡ ·""- ·ºiJ :.0!-4 .QG7 .:.~6 ,439 ,079 ,182 .049 -~t .:.°º9• • .!.°"9 • ,ofs t.D. .olo ·'"' • .00< .073 •"9 .085 - ,375 ·"'' .,¡o ·"" .... .... .... .o,s . . . ·""' .122 .oGJ . , ... . ·"' ,,..., -~~- .:.º!' .110 .375 .J. lf,S, . A.B. l\aell ·"''- ·""'- ·""'- - ·"''. ·"' . . ·""'. ·"º.i>i-o .olo .077 ·"'• .oh ·"'' ....• ·'"• ·'"'·""• ·º". s.s. •. ·"'' ....s. -·"''' -·""'- .:~' 1.s. Oxltociu .500 T.P. - . .o,o ,093 .:~' ,00:7 .:~ ,Olt :.'O!J .0,9 .:~9 .186 ·º"' .,,. ...., ..... . . ...., • .:.~ T.C • .086 .049 ���• ry Hyaluronidase "Relationship between urina and diuresis" • (Discussion) Nature , Jan . 21, 1961. 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Title A name given to the resource Cuadernos del Instituto de Investigaciones Científicas, 1965, No 7, Mayo Subject The topic of the resource Investigación Ciencia Difusión científica Tesis y disertaciones Ciencias biológicas Ciencias Químicas Description An account of the resource Publicación del Instituto de Investigaciones Científicas de la Universidad de Nuevo León, publicado en la década de los sesenta. Presenta investigación y difusión científica realizada por la Universidad, así como noticias del ámbito científico internacional. Además de presentar noticias sobre las actividades académicas y científicas de las facultades y escuelas de la UNL. Publisher An entity responsible for making the resource available Universidad de Nuevo León, Instituto de Investigaciones Científicas Contributor An entity responsible for making contributions to the resource Molina, Gilberto Fahara, A. Date A point or period of time associated with an event in the lifecycle of the resource 01/05/1965 Type The nature or genre of the resource Revista Format The file format, physical medium, or dimensions of the resource tex/pdf Identifier An unambiguous reference to the resource within a given context 2016413 Source A related resource from which the described resource is derived Fondo Universitario Language A language of the resource spa Spatial Coverage Spatial characteristics of the resource. Monterrey, N.L., (México) Access Rights Information about who can access the resource or an indication of its security status. Access Rights may include information regarding access or restrictions based on privacy, security, or other policies. Universidad Autónoma de Nuevo León Rights Holder A person or organization owning or managing rights over the resource. El diseño y los contenidos de La hemeroteca Digital UANL están protegidos por la Ley de derechos de autor, Cap. III. De dominio público. Art. 152. Las obras del dominio público pueden ser libremente utilizadas por cualquier persona, con la sola restricción de respetar los derechos morales de los respectivos autores Hormona antidiurética Proteínas Sulfhidrilos renales